膠乳增強比濁法的簡介及常見問題解決方法

1. 膠乳比濁法的定義、原理和分類

膠乳增強比濁法是目前比濁試驗中應用范圍最廣、最多的方法。當待測抗體遇到相應的抗原時，會發生聚集，形成濁度。膠乳增強比濁法則是針對復合物過少無法形成濁度的問題，衍生出一種方法，原理是將抗體吸附在直徑為60-300nm，甚至是300nm以上的微球顆粒上，增加抗原抗體的免疫復合物，從而增大信號形成濁度。通過光強度的變化即可計算出待測標本中抗原的含量（始終保持抗體過量）。膠乳增強比濁法根據檢測方法的不同可分為透射增強比濁法和散射增強比濁法，透射增強比濁法是根據光線透過渾濁介質時，光線被吸收和反射的量來計算抗原的量，光減少的量與抗原的量成正比；散射膠乳比濁法則是一定波長的光線沿水平軸照射，通過渾濁溶液，光線發生折射，光線偏轉的角度與復合物的含量成正比。

2. 膠乳增強比濁法常見的問題

問題1 蛋白無法吸附在微球上。

解決方法：加入更多的蛋白；去除微球中的表面活性劑，釋放其占據的蛋白結合位點；引入中間物，將微球與蛋白相連；改變緩沖劑。

問題2 標記時加入大量的蛋白，但是仍然無活性。

解決方法：改變蛋白的加入量，從而改變蛋白與微球結合的空間構象；使用表位稀釋物，占據微球上的部分蛋白結合位點，防止蛋白靠的太近。

問題3 清洗去除未吸附蛋白后，微球聚集。

解決方法：增加蛋白標記量或封閉劑的用量，防止有空余位。

問題4 標記后開始活性很好，儲存一段時間后，活性降低。

解決方法：降低儲存溫度到2~8度；降低儲存液的封閉劑濃度，防止抗體被替換；確認儲存液中無能與抗體競爭的雜質，防止長時間取代抗體，嘗試使用其他緩沖劑，調試PH；加入乳膠保護劑等。

問題5 PS微球與蛋白（抗體）交聯后，當時沒有發現凝集，但隔夜后發現有凝集。

解決方法：可以加一些緩沖液解決，常見的是BSA；也可以提高微球的交聯率。

問題6 EDC活化羧基乳膠微球后，加蛋白（抗體）即時有沉淀出現。

解決方法：換質量好的EDC；適當的調低緩沖液的PH值；減少EDC用量和調整活化時間。

參考文獻

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