抗體效價

我們常說的抗體效價（antibody titer）也能夠被稱為抗體滴度，是特異性抗體生物活性的重要標志，反應了特異性抗體與抗原的結合能力。抗體效價是疾病診斷、特異性免疫球蛋白制備和疫苗評價等領域的重要指標，對其檢測在臨床上意義重大。

從細胞化學角度說，抗體效價指的是抗體在保持其最佳特異性染色，并且具備最小背景染色條件下的最高稀釋倍數（通俗一點講就是抗體識別特定抗原決定部位所需要的最低濃度）。

抗體效價的表示

抗體效價通常用“1：X”的形式表示（X表示抗體可以被檢測出來的最大稀釋倍數），例如抗體效價為1:32,000，就表示抗體被稀釋到32,000倍仍可以檢測出來，再稀釋就檢測不出來了。“：”后面的數值越大，抗體效價越大，表示抗體與抗原結合能力越強。

抗體效價通常通過ELISA方法來檢測，其實驗原理為將血清樣品先稀釋一定倍數后，在酶標板中逐孔倍比稀釋加樣，采用常規ELISA方法檢測，讀取OD值。OD值高于空白對照2倍的孔判斷為陽性，顏色最淡的一孔陽性孔的稀釋倍數即為該血清樣品中目的抗體效價比。

目前常用的幾種ELISA 方法有：間接法，雙抗體夾心法和競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。

間接ELISA實驗原理

間接ELISA

包被特異性抗原：固體抗原用包被液稀釋至100μg/ml，于96孔板每凹孔加100μl，加蓋置4℃過夜。次日傾去凹孔內液體，用滴管取洗滌液在每孔中加滿稀釋/洗滌液3次，首次洗滌靜止2min后傾去，后兩次靜置1min。將反應板扣在濾紙上，以除凈液體。

簡介ELISA測定抗體效價實驗流程

封閉：每孔中加滿封閉液（約300μl多），加蓋或用封口膜封板，置37℃恒溫箱60min，傾去孔內液體，按上法洗滌3次。
加待測抗體、空白對照（PBS/Tween）：將待測抗體按倍比法用稀釋液稀釋（1:100,1：200,1:400等），取不同稀釋度的待測抗體及空白對照各100μl加至相應的凹孔中，加蓋或封板，置37℃恒溫箱1h，使抗體與固相抗原進行特異性結合，反復洗滌3次。
加酶標抗體：加入HRP標記二抗，每孔加100μl，封板后置37℃溫育1h，按上法至少洗滌5次，最后用蒸餾水洗滌2次，扣在濾紙上吸干水分。
顯色：首先按每10mlOPD加入15mlH₂O₂處理。每孔加入OPD應用液100μl、反應板置室溫暗處5~30min。當明顯顯示黃色時及時終止反應。
終止反應：每孔加入100μl 2mol/l H2SO4。由黃色變為橙色。穩定3~5min即可比色測定。
檢測：用酶聯免疫測定儀，測波長為490nm時各孔的光吸收
計算：計算待檢抗體與空白對照習慣度比（Positive/negative，P/N），當P/N大于2時為陽性，P/N小于2為陰性，取稀釋倍數最大的陽性結果為測得的抗體效價。